产品货号：
JN0113
中文名称：
单细胞全基因组DNA扩增试剂盒
英文名称：
Single Cell Whole Genome Amplification Kit
产品规格：
10T|50T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒基于多重链置换扩增的Phi29 DNA聚合酶等温扩增体系，Phi29 DNA聚合酶是从Bacillus subtilis噬菌体Phi29中克隆出的嗜温DNA聚合酶，利用基因重组技术，在大肠杆菌中进行表达后经多次纯化分离而得。Phi29 DNA聚合酶具有很强的链置换活性，可实现对DNA复杂结构的解链与复制。同时具有高效的DNA合成能力，可连续合成多达70kb的DNA片段。Phi29 DNA聚合酶具有很强的3’→5’外切酶活性，保真度高于绝大多数高保真酶，因此Phi29 DNA聚合酶特别适合用于全基因组扩增。
本试剂盒可以实现单个细胞或者少量样本的全基因组无差别扩增，一个反应可以达到40μg的全基因组DNA。低质量样品会影响DNA的最终产量，如果以DNA样品为模板，需避免使用降解的DNA作为起始模板。
- 高覆盖度：经过扩增后可达到95%以上的覆盖度。
- 高均一度：无偏好扩增，可实现全基因组的均一扩增。
- 高保真：具有很强的校正功能，保真度高。
- 高灵敏：可实现从单个细胞样本的全基因组扩增。
| 组分 | 10T | 50T |
| 细胞裂解液 | 1mL | 5×1mL |
| 中和缓冲液 | 1mL | 5×1mL |
| 反应缓冲液 | 1mL | 5×1mL |
| Phi缓冲液 | 250μL | 1.25mL |
| Phi29酶(10U/μL) | 50μL | 250μL |
| ddH2O | 1mL | 5×1mL |
保存：-20℃
经过严格的质控检验，该产品具有最高的活性和纯度。
以HEK293细胞为模板，用单细胞全基因组扩增试剂盒进行扩增，30℃反应3h。
泳道1：100个细胞全基因组扩增；
泳道2：10个细胞全基因组扩增；
泳道3：1个细胞全基因组扩增；
泳道4：阴性对照；
泳道M：DNA Ladder 2000。
适用于以1～1000个新鲜配制的细胞样品作为模板，以保证起始基因组的完整性。
- 将细胞用PBS洗涤三次。
- 取一倍体积的细胞，加入一倍体积的细胞裂解液，轻轻混匀（勿涡旋混匀）后置于冰上放置10min。
- 加入一倍体积的中和缓冲液，轻轻混匀，勿涡旋混匀。
- 从上述混合液中取3μL样品，加入7μL无菌水，10μL反应缓冲液。如果不进行后续反应，需冰上放置。
将20μL上述处理后的样品加入到25μLPhi缓冲液中。 - 加入5μLPhi29酶，30℃反应3h。
- 65℃加热10min失活Phi29酶。
- 扩增产物是高浓度基因组DNA，需要将扩增产物用无菌水或者TE缓冲液进行稀释后进行下游实验。
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